ICS 65.020.01 B23 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB 32/ T 3863—2020 甘薯抗茎线虫病鉴定技术规程 Technical regulation for evaluation on sweetpotato resistance to stem nematode disease 2020 - 10 - 13 发布 江苏省市场监督管理局 2020 - 11 - 13 实施 发 布 DB32/T 3863-2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由江苏徐州甘薯研究中心提出。 本标准有江苏省农作物标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：江苏徐州甘薯研究中心。 本标准起草人：孙厚俊、谢逸萍、张成玲、杨冬静、徐振、赵永强、马居奎、谢睿寰、唐伟、孙井 康。 I DB32/T 3863-2020 甘薯抗茎线虫病鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了甘薯品种（系）对茎线虫病抗性鉴定的鉴定方法、抗性评价标准和鉴定记载表格。 本标准适用于甘薯品种（系）对茎线虫病抗病性的田间自然诱发鉴定和室内接种鉴定。 2 规范性引用标准 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4406 种薯 GB 7413 甘薯种苗产地检疫规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 感病对照品种 susceptible control variety 为检验试验的可靠性，在品种抗病性鉴定时附加的已知抗性为感病的品种，本标准中感病对照品种 为栗子香。 3.2 人工接种鉴定 evaluation of artificial inoculation 用人工繁殖或收集病原线虫，按一定量接种，创造发病条件，根据茎线虫病发病程度确定品种抗病 性。 3.3 高温愈合 heat treated to wound healing 在甘薯入窖初期，采用人工加温方法促进伤口迅速愈合的一种措施。 3.4 相对病情指数 将供试品种（系）的病情指数与高感对照病情指数进行比较，经过公式计算而换算出的病情指数。 3.5 体积比 1 DB32/T 3863-2020 人工接种鉴定时茎线虫侵染的体积与薯块体积的比值。 4 鉴定方法 4.1 自然诱发鉴定 4.1.1 病圃选择 选择排灌方便，肥力中等，甘薯茎线虫病发生较重且均匀的田块作为鉴定圃。 4.1.2 薯苗准备 将符合GB 4406要求的种薯在无病苗床排种育苗，将待鉴定品种薯苗离苗床土层3 cm～5 cm剪下， 长度20 cm～25 cm。外寄鉴定材料应按照GB 7413要求进行检疫。每品种剪取三组薯苗，每组6株～8株， 按名单编号分别挂上名称、编号、试验重复的牌子，备用。 4.1.3 栽种及管理 5月上中旬起垄栽种，垄宽75 cm～85 cm，每垄划分成不同的小区，小区之间留隔离部分50 cm。采 用“Z”字形方式栽种，试验设3次重复，随机区组排列，每重复供试品种（系）6株～8株，株距23 cm～ 25 cm，选用栗子香为高感对照品种，每隔10个鉴定品种（系）栽种栗子香一垄，栽种后正常管理。 4.1.4 病情调查与分级 10月中旬进行调查薯块发病情况。人工将薯块刨出，用刀将薯块横切两刀，目测线虫侵染的面积， 根据侵染横截面积进行分级，每个薯块均需调查，记载发病情况。分级标准如下： ——0 级：无病； ——1 级：0%＜为害面积占薯块横切面积比率≤25%； ——3 级：25%＜为害面积占薯块横切面积比率≤50%； ——5 级：50%＜为害面积占薯块横切面积比率≤75%； ——7 级：75%＜为害面积占薯块横切面积比率≤100%。 4.1.5 病情指数及防治效果计算 依据病情调查情况，按式（1）计算病情指数。 式中： DI------病情指数； Ni------第 i 病害级别的薯块数； i ------为害级别值； M------ 调查的总薯块数。 依据病情指数结果，按式（2）计算相对病情指数。 相对病情指数精确至 0.1，对照品种病情指数为鉴定圃中所有对照的平均病情指数。 4.1.6 鉴定有效性判断 田间鉴定对照品种的平均病情指数大于 60，鉴定结果判定有效。 2 DB32/T 3863-2020 4.2 室内接种鉴定 4.2.1 病原线虫分离及消毒 人工采集病薯块，采用贝曼漏斗法分离线虫。将分离好的线虫用 400 目筛网过滤，筛网内收集线虫， 用灭菌水冲洗 3 次，放入 0.1%青霉素+0.1%链霉素的消毒液中，4 ℃环境放置 12 h，用 400 目筛网过滤， 灭菌水冲洗 3 次，灭菌水配成 200 条/ml 的线虫悬浮液备用。 4.2.2 鉴定材料准备 选用大小300 g～400 g薯块作为鉴定用薯块，每个供试品种（系）选3块，洗净晾干后编号备用。选 用栗子香为高感对照品种。鉴定薯块随机或顺序排列在80 cm×40 cm的塑料筐内，每筐放置对照品种薯 块2个～3个，每份鉴定材料重复3次，每重复2个薯块。接种前用75%酒精对薯块表面进行消毒处理。 4.2.3 接种材料 接种时需要5 mm螺纹打孔器，12 cm玻璃培养皿若干套，手术刀、手术镊各1把，1 ml移液枪一支 及枪头若干，酒精灯1只，电磁搅拌器1台。将打孔器、培养皿、烧杯、手术刀、手术镊灭菌后备用。 4.2.4 接种方法 用打孔器垂直在薯块中部打孔，深度至薯块中下部，用移液枪将1 ml配好的线虫悬浮液加入孔中， 将打出的薯条切除下方1.5 cm，再用剩余薯条封住孔口，用融化的石蜡密封孔口缝隙，放入用75%酒精 消毒过的塑料筐内。接种后将筐置于26 ℃～28 ℃鉴定室内保湿培养。线虫悬浮液应处于搅拌状态，且 每打孔一个薯块后打孔器需用酒精灯消毒。 4.2.5 病情调查 接种后45 d调查薯块发病情况。先将薯块沿打孔部位横切，分别量取横切面薯块直径和线虫侵染直 径，再将薯块沿中心纵切，量取薯块纵切面的薯块长度和线虫侵染长度。 4.2.6 发病体积比计算 依据病情调查结果，按式（3）计算茎线虫病发病体积比： 按式（4）计算相对比： 品种（系）体积比精确至 0.1%。 5 抗性评价标准 5.1 自然诱发鉴定评价标准 根据相对病情指数评价甘薯茎线虫病抗侵入性，将甘薯品种（系）划分为免疫、高抗、中抗、高感， 4个类型，评定标准如下： ——免疫：相对病情指数为 100； ——高抗：70≤相对病情指数＜100； ——中抗：30≤相对病情指数＜70； ——高感：0≤相对病情指数＜30。 3 DB32/T 3863-2020 5.2 室内接种鉴定评价标准 根据品种（系）侵染比评价甘薯茎线虫病抗扩展性，将甘薯品种（系）划分为免疫、高抗、中抗、 高感，4个类型，评定标准如下： ——免疫：相对体积比 100% ——高抗：70%≤相对体积比＜100%； ——中抗：30%≤相对体积比＜70%； ——高感：0≤相对体积比＜30%。 6 鉴定记载表格 甘薯抗茎线虫病鉴定记载表格见表1和表2。 表1 甘薯抗茎线虫病鉴定记载表（自然诱发鉴定） 编号 品种（系 名称） 病 情 级 别 重复 0 1 3 5 7 病情 相对病 平均相 抗性 指数 情指数 对病指 评价 Ⅰ Ⅱ Ⅲ …… 栽种日期： 调查日期： 鉴定人（签字） ： 表2 甘薯抗茎线虫病鉴定记载表（室内接种鉴定） 编号 品种（系 名称） 发病情况（cm） 重复 薯块 病斑 薯块 病斑 直径 直径 长度 长度 体积比 相对体 平均相对 积比 体积比 抗性评价 Ⅰ Ⅱ Ⅲ …… 接种日期： 调查日期： 鉴定人（签字） ： ___________________________ 4