ics ICS 97.195 Y 50 宣 DB3418 城 市 地 方 标 准 DB3418/T 007—2019 毛笔笔锋霉变的测试方法 Test method for mould of writing brush 2019 -03-20 发布 2019- 04-20 实施 宣城市市场监督管理局 发布 DB3418/T 007—2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省文房四宝标准化技术委员会提出并归口。 本标准主要起草单位：宣城市产品质量监督检验所。 本标准主要起草人：洪润、吴成、柳叶、周万鹏、童伟。 I DB3418/T 007—2019 毛笔笔锋霉变的测试方法 1 范围 本标准规定了毛笔笔锋霉变的检测方法。 本标准适用于毛笔及工艺类似的毛笔笔锋霉变的检测，不适用其他笔类。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 1.1 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写 GB 4789.2 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定 3 设备和材料 3.1 培养箱：28 ℃± 1 ℃。 3.2 电子天平：精确度0.1 g。 3.3 无菌锥形瓶：容量500 mL。 3.4 无菌吸管：1 mL、10 mL。 3.5 无菌试管：18 mm×180 mm。 3.6 旋涡混合器。 3.7 无菌平皿：直径90 mm。 3.8 恒温水浴箱：46 ℃± 1 ℃。 3.9 显微镜：10倍~100倍。 3.10 移液枪及移液吸管：100 μL~1 000 μL、1 000 μL~10 000 μL。 4 培养基和试剂 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 蒸馏水。 生理盐水：见附录A.1。 马铃薯葡萄糖琼脂：见附录A.2。 孟加拉红琼脂：见附录A.3。 磷酸盐缓冲液：见附录A.4。 5 检验程序 霉菌计数法检验程序见图1。 1 DB3418/T 007—2019 图 1 霉菌平板计数法的检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 用无菌剪刀剪取至少3支待测毛笔笔锋，要求剪取全部毛笔笔锋进行混匀，称取样品1 g，精确至 0.1 g，加入9 mL无菌稀释液(生理盐水或磷酸盐缓冲液)，在旋涡混合器中充分混合1 min~2 min，制成1： 10的样品匀液。 6.1.2 用移液枪吸取1 mL 1：10样品匀液注入含有9 mL无菌稀释液的试管中，在旋涡混合器上混匀，此 液为1：100的样品匀液。 6.1.3 按6.1.2操作步骤，制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1支1 mL无菌吸管。 6.1.4 选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1 mL样 品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。 6.1.5 及时将冷却至46 ℃ 的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂(可放置于46 ℃土1 ℃恒温水浴箱中保 温)倾注平皿中，倾注体积为20 mL~25 mL，同时均匀转动平皿使其混合均匀。将其放置于水平台面待 培养基完全凝固。 6.2 培养 培养基凝固后，正置平板，放置于28 ℃士1 ℃ 培养箱中培养，观察并记录培养至第120 h的结果。 6.3 霉菌菌落计数 用肉眼或放大镜观察，记录稀释倍数和相应的霉菌菌落数。以菌落形成单位(colony-forming units， CFU)表示。 2 DB3418/T 007—2019 选取菌落数在10 CFU~150 CFU的平板，根据菌落形态计数霉菌。霉菌蔓延生长覆盖整个平板记录 为菌落蔓延。 7 结果与报告 7.1 结果 7.1.1 计算同一稀释度的两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数。 7.1.2 若有两个稀释度平板上菌落数均在10 CFU~150 CFU之间，则按照GB 4789.2的相应规定进行计算。 7.1.3 若所有平板上菌落数均大于150 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不 可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 7.1.4 若所有平板上菌落数均小于10 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.1.5 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在10 CFU~150 CFU之间，其中一部分小于10 CFU或大于150 CFU 时，则以最接近10 CFU或150 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.2 报告 7.2.1 菌落数按“四舍五入”原则修约。菌落数在10以内时，采用一位有效数字报告；菌落数在10~100 之间时，采用两位有效数字报告。 7.2.2 菌落数大于或等于100时，前第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代 替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。 7.2.3 若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。 7.2.4 称重取样以CFU/g 为单位报告。 3 DB3418/T 007—2019 附 录 A （规范性附录） 培养基和试剂 A.1 生理盐水 A.1.1 成分 氯化钠 蒸馏水 8.5 g 1 000 mL A.1.2 制法 氯化钠加入 1 000 mL 蒸馏水中，搅拌至完全溶解，分装后，121 ℃ 灭菌 15 min，备用。 A.2 马铃薯葡萄糖琼脂 A.2.1 成分 马铃薯(去皮切块) 葡萄糖 琼脂 氯霉素 蒸馏水 300 g 20.0 g 20.0 g 0.1 g 1 000 mL A.2.2 制法 将马铃薯去皮切块，加 1 000 mL 蒸馏水，煮沸 10 min~20 min。用纱布过滤，补加蒸馏水至 1 000 mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶解，分装后，121 ℃ 灭菌 15 min，备用。 A.3 孟加拉红琼脂 A.3.1 成分 蛋白胨 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁(无水) 琼脂 孟加拉红 氯霉素 蒸馏水 5.0 g 10.0 g 1.0 g 0.5 g 20.0 g 0.033 g 0.1 g 1 000 mL A.3.1 制法 上述各成分加入蒸馏水中，加热溶解，补足蒸馏水至 1 000 mL，分装后，121 ℃ 灭菌 15 min，避 光保存备用。 A.4 磷酸盐缓冲液 A.4.1 成分 磷酸二氢钾 34.0 g 4 DB3418/T 007—2019 蒸馏水 500 mL A.4.2 制法 贮存液：称取 34.0 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水中，用大约 175 mL 的 1 mol/L 氢氧化钠 溶液调节 pH 至 7.2土0.1，用蒸馏水稀释至 1 000 mL 后贮存于冰箱。 稀释液：取贮存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌 15 ℃ min。 _________________________________ 5