ICS 65.020.01 B 05 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 1930—2019 泡桐组织培养快繁技术规程 2019 - 11 - 21 发布 河南省市场监督管理局 2020 - 02 - 21 实施 发 布 DB41/T 1930—2019 目 次 前 言 ............................................................................... II 1 范围 .............................................................................. 1 2 术语和定义 ........................................................................ 1 3 外植体的无菌化培养 ................................................................ 1 4 芽诱导 ............................................................................ 2 5 增殖培养 .......................................................................... 2 6 生根培养 .......................................................................... 2 7 炼苗与移栽 ........................................................................ 2 I DB41/T 1930—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河南省林业局提出并归口。 本标准起草单位：河南农业大学、河南省林业科学研究院。 本标准主要起草人：范国强、翟晓巧、赵振利、陈卓、刘荣宁、李永生、曹喜兵、林海、刘辉。 II DB41/T 1930—2019 泡桐组织培养快繁技术规程 1 范围 本标准规定了泡桐组织培养快繁的术语和定义、外植体的无菌化培养、芽诱导、增殖培养、生根培 养、炼苗移栽、档案管理。 本标准适用于泡桐组织培养快速繁殖。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 泡桐组织培养 在无菌条件下，将泡桐的种子、叶片或茎段接种在装有人工配制培养基的培养瓶中。将培养瓶放置 于人工控制光照和温度的组织培养室内，使之生长、分化或发育成完整植株的培养技术。 2.2 外植体 从植物活体上切取下来用于建立组织培养体系的材料，包括完整植株、器官或组织。 2.3 植物生长调节物质 调节植物生长发育的物质。 2.4 芽诱导 将培养材料在诱导培养基中进行培养，分化出不定芽的过程。 2.5 增殖培养 把外植体培养获得的培养物转移到增殖培养基中，使培养物得以成倍增殖的过程。 2.6 生根培养 将芽转移到生根培养基中进行生根培养，形成完整植株的过程。 3 外植体的无菌化培养 3.1 枝条无菌化材料培养 取生长健康的泡桐当年生带有腋芽或顶芽的嫩枝，用清水清洗后，先用质量分数为0.1% HgCl2消毒 8 min，再用无菌水清洗5次，然后接种于不附加植物生长调节物质的MS基本培养基上。培养基中蔗糖浓 度20 g/L，琼脂浓度3.0 g/L～8.0 g/L。培养瓶放置于培养室中，培养温度25 ℃±2 ℃，光照强度 2 130 μmoL/m ·s，光照时间16 h/d。60 d可获得3～4对叶片的无菌材料，其叶片和茎段用作芽诱导的材 料。 1 DB41/T 1930—2019 3.2 种子无菌化材料培养 采集生长健康的泡桐当年生种子，先用70%酒精消毒30 s，再放入0.1%HgCl2溶液中进行浸泡消 毒5 min，然后用无菌水冲洗3～5次。最后将种子接种于不附加植物生长调节物质的MS培养基上，培养 基中蔗糖浓度 20 g/L，琼脂浓度5.0 g/L 。培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间 同3.1。50 d后可获得3～4对叶片的无菌材料，其叶片和茎段用作芽诱导的材料。 4 芽诱导 4.1 叶片外植体芽的诱导 将获得的无菌叶片沿主脉切成约1.0 cm×2.0 cm的外植体，接种于附加不同浓度6-BA（8 mg/L～ 18 mg/L ）和NAA（0.1 mg/L～0.5 mg/L）的MS培养基上，培养基中蔗糖浓度20 g/L，琼脂浓度5.0 g/L 。 培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间同3.1。培养35 d后，在叶缘处分化出芽。 4.2 茎段外植体芽的诱导 将获得的无菌茎段切成长1 cm左右的外植体，接种于附加不同浓度6-BA（10 mg/L～18 mg/L）和NAA （0.2 mg/L～0.5 mg/L）的MS基本培养基上，培养基中蔗糖浓度20 g/L，琼脂浓度5.0 g/L。培养瓶放 置于培养室中，培养温度、光照强度和光照时间同3.1。培养30 d后分化出芽。 5 增殖培养 将诱导出的芽接种于附加不同浓度6-BA（8 mg/L～12 mg/L）和NAA（0.1 mg/L～0.5 mg/L）的MS基 本培养基上，培养基中蔗糖浓度20 g/L，琼脂浓度5.0 g/L。培养瓶放置于培养室中，培养温度、光照 强度和光照时间同3.1。35 d后长出丛生芽。 6 生根培养 当诱导出的泡桐芽长到约3 cm时，从茎基部切下，接种于附加不同浓度NAA（0.1 mg/L～ 0.5 mg/L） 的1/2MS培养基上进行生根培养，培养基中蔗糖质量浓度为20 g/L，琼脂4.5 g/L。培养瓶放置于培养室 中，培养温度、光照强度和光照时间同4.1。7 d后分化出根。 7 炼苗与移栽 当泡桐幼苗的根在生根培养基上长到约3 cm时，逐步去掉组培瓶盖，在温室内锻炼7 d，然后移入 盛有蛭石或草炭土（经5%的高锰酸钾消毒处理或121 ℃高温灭菌20 min）的营养钵中。用1/2MS营养液 浇灌湿润，放到温室中培养，温室温度25 ℃～28 ℃，开始2周空气湿度85%以上，2周后湿度逐渐降低 与室外环境相同，4～5周后，可以移栽到大田中。 8 档案管理 建立泡桐组织培养基本情况档案，包括以下内容：品种名称、材料来源、培养过程、培养照片等。 档案由组培人员填写，档案填写后，及时整理归档。 ________________________________ 2